Peptid-tisztítás

Az adott aminosav-sorozatokkal rendelkező peptidmek színtéséhez az Fmoc-SPPS (szilárd fázisú peptidszintézis) módszert alkalmazzuk.

Háttér:

A peptidék biológiai aktív anyagok, amelyek kapcsolódnak a biológiai szervezetek különféle sejti függvényeire. A molekuláris szerkezete az aminosavak és a fehérjelek között helyezkedik el, és több aminosáv található benne egy adott sorrendben, amelyek peptidekötések (—NH—CO—) által vannak összekapcsolva. Két aminosavmolekula dehydration kondenzációja alkotott vegyületeket dipeptidéknak nevezzük, hasonlóan vannak tripeptidék, tetrapeptidék, pentapeptidék, stb., legfeljebb nonapeptidékká. Általánosan 10-tól 100 aminosavmolekula dehydration kondenzációja alkotott vegyületeket polipeptidéknak nevezzük.

A peptid szolgáltatások a peptidek szintézisére vonatkoznak az ügyfél igényei alapján, például sorozat, tisztaság, molekuláris súly és sótartalom alapján, hogy megfeleljenek a konkrét igényeknek. A molekuláris súlyt tömegspektrometriai módszerrel erősítjük meg, hogy biztosítsuk a kezdeti MS helyességét, majd tisztítást végezünk magas teljesítményű folyadék kromatográfiás rendszerrel, utána koncentrálás és lyofillizálás következik finom peptidporral.

Konkrét aminosav-sorozatú peptid-megszerzés érdekében az Fmoc-SPPS (szilárd fázisú peptid szintézis) módszert használjuk. A szilárd fázisú szintézis során olyan csoportot vezetünk be a szilárd fázisú hordozóra, amely reagálhat a karbonylcsoportokkal, hogy reagáljon az amin-védővel védett aminossal, és rögzítse az első aminosavt a rezenszen. Ezután a reakció a C-végénként haladva N-végig folytatódik a cél peptid-sorozat szintéziséhez.

Tisztítási módszerek:

A cégünk egy magas teljesítményű folyadékromatográfiai rendszert használ reverse C18 előkészítő oszloppal szétválasztási és tisztítási célokra, a következő lépésekkel:

Azonosítás: Vegyünk kis mennyiségű nyers peptidot tömegspektrometriai elemzésre a cél peptid jelenlétének megerősítéséhez (ha igen, erősítse meg az analitikus romatográfiával a tartóidőt a C18 oszlopban; ha nem, újraszintézzük a nyers peptidet).

Oldás: Használjunk ultrahangos segítséget az oldás során, általánosan 90%-os víz + 10%-os acetonitril (metanol vagy izopropanol) alkalmazásával. Nehéz oldhatóság esetén adjunk alkalmas mennyiségű ecetsav vagy trifluorecetsav-t az oldódást segítségezésre, ha a sorozat alapvetően bázisos aminoksavakból áll; adjunk alkalmas mennyiségű ammóniavíz-t, ha az aszonosságú aminoksavak uralkodnak. Használjuk a DMSO-t (dimetilsulfoxid), ha hidrofób aminoksavak uralkodnak.

Szűrés: Szűrjük el a disszolvált nyers terméket 0,45 µm-s szűrőmembrán keresztül (a preparatív oszlop védelmére), későbbi felhasználásra.

Minta betöltése: Használja a nagy teljesítményű folyadék előkészítő rendszert a folyadékmintavételhez az előkészítő oszlopba.

Elütés: Az 1. lépésben meghatározott elütemi gradiens alapján szétválasztja a szennyezéseket a peptidektől a különböző hosszúságú peptidök poláriságának különbségével.

A nagy teljesítményű folyadék kromatográfiai rendszer használatának előnyei:

Nagyobb felbontás más kromatográfiai módszerekkel összehasonlítva; a használt C18 előkészítő oszlop nagy oszlophatékonysággal, hosszú szolgáltatóélettel és jó reproduktibilitással rendelkezik, amely lehetővé teszi a többszörös használatot; gyors sebesség és magas hatékonyság, mivel minden mintát néhány vagy tíz perc alatt tisztítanak meg; széles alkalmazáskör és érett technológia a fordított fázisú kromatográfiánál, amely jót kínál a különböző típusú szerves vegyületek számára a választóerejük miatt.

Fokhagyma peptidok tisztítása és lyofillizálása:

A nyers peptidet egy nagy teljesítményű folyadék-kromatográfiai előkészítő rendszerrel szétválasztják és tisztítják, és a szélességi tisztaság elemzésére egy nagy teljesítményű folyadék-kromatográfiát (HPLC) használnak a minőséges folyadékok komponenseinek megszerzéséhez.

Forgó evaporációs rendszer: A minőséges folyadékot vakuumos melegítéssel kezelik az könnyen volátil szerves oldóanyagok eltávolítására, végül pedig megkapják a célpontos peptidet tartalmazó megoldást, amelyet keménynél tárolnak jéghidekszek formájába rendezve.

Keményítő-rendszer: A tárolókat, amelyek a szilárd jéghidekszeket tartalmazzák, a keményítő tálcára vagy vakuumcsatornára helyezik. Vakuum környezetben a peptid termék sublimálódik, végső soron pedig szilárd peptiddarabokat kapunk.

A peptid kristallek keményítésre vannak készülve a keményítőben.