Пептидно чишћење

Да би се добили пептиди са специфичним аминокиселинским секвенцама, користимо методу Фмоц-СППС (силна фаза пептидне синтезе).

Запад:

Пептиди су биоактивне супстанце које су повезане са различитим ћелијским функцијама у биолошким организамима. Њихова молекуларна структура лежи између аминокиселина и протеина, која се састоји од више аминокиселина распоређених у одређеном редоследу и повезаних пептидним везама (NHCO). Компонације формиране дехидрацијом и кондензацијом два аминокиселина се називају дипептиди, слично, постоје трипептиди, тетрапептиди, пентапептиди и тако даље, све до нонапептида. Компонације које се обично чине од 10 до 100 аминокиселинских молекула дехидрацијом се називају полипептиди.

Услуге за прилагођавање пептида се односе на синтезу пептида на основу захтева клијента, као што су секвенца, чистота, молекуларна тежина и садржај соли, како би се задовољиле специфичне потребе. Молекуларна тежина се потврђује масовном спектрометријом како би се осигурала тачност сировог МС, а затим чишћење помоћу високо-производног система течне хроматографије, затим концентрација и лиофилизација како би се добио фини пептидни прах.

Да би се добили пептиди са специфичним аминокиселинским секвенцама, користимо методу Фмоц-СППС (силна фаза пептидне синтезе). Током синтезе чврсте фазе, група која је способна да реагује са карбоксилним групама увођена је на носиоцу чврсте фазе да би реаговала са амино-заштићеном амино, зацвршћујући прву аминокиселину на смолу. Реакција се затим завршава од Ц-конца до Н-конца како би се завршила синтеза циљане пептидне секвенце.

Методе пречишћавања:

Наша компанија користи високо-производни систем течне хроматографије са обрнутим Ц18 припремним колоном за сепарацију и пречишћавање, следећи следеће кораке:

Идентификација: Узима се мала количина сировог пептида за масно спектрометрију како би се потврдила присуство мета пептида (ако је да, потврди време задржавања у колони Ц18 путем аналитичке хроматографије; ако не, ресинтезирајте сирови пептид).

Растворење: Употребити ултразвучну помоћ за растворење, обично одабирајући 90% воде + 10% ацетонитрила (метанола или изопропанола). За тешко растворљивост, додајте одговарајућу оцетну киселину или трифлуороцетну киселину да бисте олакшали растворење ако секвенца има већи удео основних аминокиселина; додајте одговарајућу воду амонијака ако су киселе аминокиселине преовлађујуће. Ако су преовлађујуће хидрофобне аминокиселине, користите ДМСО (диметил сулфоксид).

Филтрисање: Растворени сирови производ филтрира се кроз 0,45 μm филтерску мембрану (да би се заштитила припремна колона) за каснију употребу.

Узорак за пртљагње: Користити високо-продуктивни систем за припрему течности за улазак течног узорка у припремну колону.

Елуција: На основу градијента елузије одређеног у кораку 1), одвојите нечистоће од пептида користећи разлике полярности пептида различитих дужина.

Предности коришћења високо-производних течних хроматографских система:

Виша резолуција од других метода хроматографије; кориштена припремна колона Ц18 има високу ефикасност колоне, дуг животни век и добру репродуктивност, омогућавајући понављајућу употребу; брза брзина и висока ефикасност, са сваком узорком који се очисти за неколико минута или десетина минута; широ

Чишћење и лиофилизација сирових пептида:

Сирови пептид се одваја и чисти помоћу високоперформансног припремног система за течну хроматографију и анализира за чистоћу помоћу високоперформансног течног хроматографа (ХПЛЦ) како би се добиле квалификоване течне компоненте.

Ротациони систем испарења: Квалификована течна компонента се подвргну вакуумском загревању како би се уклонили лако летљиви органски растварачи, коначно добијајући раствор који садржи метани пептид, који се затим ставља у замрзивач како би се формирали чврсти кри

Систем замрзавања: Контејнери који садрже чврсте кристале леда стављени су на подножје замрзавача или вакуумски отвор. У вакуумском окружењу, пептидни производ се сублимира, што на крају даје чврсти пептидни прах.

Пептидни кристали су спремни за сушење у сушилишту.