펩타이드 정제

특정 아미노산 서열을 가진 펩타이드를 얻기 위해 우리는 Fmoc-SPPS(고체상 펩타이드 합성) 방법을 사용합니다.

배경:

펩타이드는 생물학적 기체의 다양한 세포 기능과 관련된 생물학적으로 활성인 물질입니다. 그들의 분자 구조는 아미노산과 단백질 사이에 있으며, 특정 순서로 배열된 여러 아미노산으로 이루어져 있으며 펩타이드 결합(—NH—CO—)으로 연결됩니다. 두 개의 아미노산 분자가 탈수 축소를 통해 형성된 화합물은 디펩타이드라고 하며, 마찬가지로 트라이펩타이드, 테트라펩타이드, 펜타펩타이드 등에서 비테나펩타이드까지 있습니다. 일반적으로 10개에서 100개의 아미노산 분자가 탈수 축소를 통해 형성된 화합물은 다펩타이드라고 합니다.

펩타이드 맞춤 서비스는 고객의 요구 사항(예: 서열, 순도, 분자량, 염 함량)에 따라 펩타이드를 합성하여 특정 필요를 충족시키는 것을 의미합니다. 분자량은 원료 MS의 정확성을 확보하기 위해 질량 분광법으로 확인되며, 고성능 액체 크로마토그래피 시스템을 사용하여 정제한 후 농축 및 동결 건조를 거쳐 세밀한 펩타이드 분말을 얻습니다.

특정 아미노산 서열의 펩타이드를 얻기 위해 우리는 Fmoc-SPPS (고리상 펩타이드 합성) 방법을 사용합니다. 고리상 합성 중, 고리상 운반체에 카복실 기와 반응할 수 있는 기가 도입되어 아미노 보호된 아미노기를 반응시켜 첫 번째 아미노산을 레진에 고정합니다. 이후 반응은 C단에서 N단 방향으로 진행되어 목표 펩타이드 서열 합성이 완료됩니다.

정제 방법:

우리 회사는 분리 및 정제를 위해 역상 C18 준비 컬럼을 사용하는 고성능 액체 크로마토그래피 시스템을 사용하며, 다음 단계를 따릅니다:

식별: 원시 펩타이드의 일부를 취해 질량 분광법을 통해 대상 펩타이드의 존재를 확인합니다(만약 그렇다면, 분석 크로마토그래피를 통해 C18 컬럼에서의 보유 시간을 확인하세요; 그렇지 않다면 원시 펩타이드를 재합성하세요).

용해: 초음파 보조를 사용하여 용해시키며, 일반적으로 90% 물 + 10% 아세토니트릴(메탄올 또는 이소프로판올)을 선택합니다. 용해가 어려울 경우, 기본적인 아미노산 비율이 높은 시퀀스라면 적절한 양의 초산이나 삼플루오로초산을 추가하여 용해를 돕습니다; 산성 아미노산이 주된 경우 적절한 양의 암모니아 수를 추가합니다. 수지성 아미노산이 주된 경우 DMSO(디메틸설팱)를 사용합니다.

여과법: 용해된 원시 제품을 0.45 µm 필터 막으로 여과하여(준비 컬럼을 보호하기 위해) 후속 사용을 위해 준비합니다.

샘플 로딩: 고성능 액체 준비 시스템을 사용하여 액체 샘플을 준비 컬럼에 입력하세요.

Elu동: 1) 단계에서 결정된 엘류션 그라디언트를 기반으로, 다양한 길이의 펩타이드의 극성 차이를 이용하여 불순물과 펩타이드를 분리합니다.

고성능 액체 크로마토그래피 시스템을 사용하는 이점:

다른 크로마토그래피 방법보다 더 높은 해상도; 사용된 C18 준비 컬럼은 높은 컬럼 효율, 긴 수명, 좋은 재현성을 가지고 있어 반복적으로 사용 가능하며, 각 샘플이 몇 분 또는 십 분 안에 정제되고, 역상 크로마토그래피의 넓은 응용 범위와 성숙한 기술로 다양한 유기 화합물에 대해 좋은 선택성을 제공합니다.

원료 펩타이드 정제 및 동결 건조화:

원시펩타이드는 고성능 액체 크로마토그래피 준비 시스템을 사용하여 분리 및 정제되며, 고성능 액체 크로마토그래프(HPLC)를 통해 순도가 분석되어 합격한 용액 성분을 얻습니다.

회전 증발 시스템: 합격한 액체 성분은 진공 가열을 통해 쉽게揮발하는 유기 용매를 제거하여 최종적으로 목표 펩타이드를 포함한 용액을 얻고, 이를 냉동고에 넣어 고체 얼음 결정을 형성합니다.

냉동 건조 시스템: 고체 얼음 결정이 든 용기는 냉동 건조기의 선반 또는 진공 포트에 배치됩니다. 진공 환경에서 펩타이드 제품이 빠져나가면서 최종적으로 고체 펩타이드 분말을 얻게 됩니다.

펩타이드 결정은 냉동 건조기에 의해 냉동 건조될 준비가 되었습니다.